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上周小编带大家了解了青黛化学成分、质量控制和药理作用及其在治疗牛皮藓、白血病和溃疡性结肠炎方面的临床试验介绍（点下方链接阅读），相信大家对青黛这个神仙药材有了很大的了解~

ChineseMedicine丨中药青黛——集美貌与才华于一身

接下来我们就近日复旦大学对青黛的体外抗炎和抗病毒活性评估的研究发现进行介绍，相关研究发表在期刊ChineseMedicine(IF=2.)上。

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研究内容简介目的：流感病毒以及严重急性呼吸道冠状病毒（SARS-CoV-2）引起的COVID-19大流行引起的感染导致急性肺损伤（ALI）和多器官衰竭，该文旨在研究青黛对甲型流感病毒（IAV）诱导的ALI小鼠的影响。方法：BALB/c小鼠鼻内接种IAV（HINI）后2小时，口服INAE（40、80、mg/kg/day）给药处理，持续4或7天，记录小鼠的寿命和死亡率。通过免疫组织学染色评估高迁移率box-1蛋白（HMGB-1）和toll样受体4（TLR4）的表达，ELISA检测炎性细胞因子。结果：INAE抑制了Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞的病毒复制，降低了脂多糖（LPS）刺激的腹膜巨噬细胞中NO的产生。口服mg/kg的INAE组可以显著提高IAV感染小鼠的寿命（p0.01）和存活率，改善肺损伤并降低肺组织中的病毒复制（p0.01）。INAE不同浓度治疗均可显著增加肝脏重量和肝脂数（p0.05），并降低血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）的水平（p0.05），肺组织中的HMGB-1和TLR4的表达也受到抑制。INAE的处理抑制了肺组织中的髓过氧化物酶（MPO）和亚甲基二氧苯丙胺（MDA）的增加。此外，INAE的治疗可降低高水平的干扰素α（IFN-α）、干扰素β（IFN-β）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1），促进正常T细胞表达和调节分泌因子（RANTES）、诱导调节蛋白（IP-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6），促进干扰素γ（IFN-γ）和白介素10（IL-10）的产生。结论：INAE治疗IAV诱导的ALI小鼠的机制与其抗流感、抗炎和抗氧化特征有关，表明青黛临床治疗IAC诱导的ALI具有较大的潜力。图文解析

INAE化学成分表征

通过UPLC-ESI-LTQ-MS正离子模式下分析和鉴定了INAE中19个成分，包括13个生物碱、3个核苷、1个萜烯、1个氨基酸和1个有机酸。

INAE体外抗流感和抗炎活性

INAE在浓度达μg/mL时未对细胞产生毒性。上图显示，INAE在病毒感染前2小时给药以干扰病毒与细胞的黏附过程，随着化合物浓度增加到μg/mL，病毒复制的抑制达60%。病毒与INAE孵育后治疗组和病毒感染后给药INAR组处理的细胞2小时后均未观察到明显的抑制作用。由此可以得出，INAE抑制了病毒与细胞的黏附过程，但对病毒没有直接的杀灭作用。

INAE改善IAV感染小鼠的存活率

连续14天观察感染IAV后的小鼠，临床症状主要表现为竖毛、皮毛褶皱、进食减少和体重减轻。INAE显著延长了感染IAV的小鼠的寿命，模型组小鼠的存活时间明显较短。14天期间，正常对照组小鼠没有死亡，模型组小鼠感染IAV后7天开始出现死亡，第9天小鼠全部死亡。与模型组相比，INAE40和80mg/kg组在第8-9天以及mg/kg剂量组在第8-12天小鼠的存活率均显著提高。

INAE缓解IAV引起的急性肺损伤

INAE给药后评估其对IAV诱导的ALI的影响。IAV感染后的小鼠的体重减轻以及肺指数增加。如图，自IAV然后的第二天起，模型组小鼠第二天体重开始减轻且肺指数明显升高。相比之下，INAE和利巴韦林治疗组的小鼠在第三天和第四天显著升高，并显著降低肺指数。病理结果显示，正常组小鼠的肺部大小、颜色和质地正常，肺泡细胞清晰完整。相反，在模型组中，大面积的肺泡细胞和细支气管被破坏，大多数肺泡壁被破坏。受损的肺泡中观察到大量炎性细胞浸润，且细支气管中的肺细胞脱落。在INAE治疗组中，小鼠肺组织损伤明显减少，炎性细胞浸润也明显减少。

INAE降低IAV感染小鼠的病毒滴度

TCID50评估病毒复制和病毒滴度的急性肺损伤。如图4d为INAE和利巴韦林处理的小鼠肺匀浆中的病毒滴度，结果表明，病毒滴度的降低与INAE对急性肺损伤的保护作用一致。

INAE减少了肝脏、胸腺和脾脏的损伤

IAV引起的急性肺损伤模型通常用于抗流感药物的研究。一旦小鼠感染IAV，大量感染流感病毒的肺细胞就会导致肺组织细胞坏死和凋亡，并引起急性肺损伤。如图所示，与正常组相比，模型组小鼠的肝脏、胸腺和脾脏的重量显著降低。相比之下，INAE的治疗显著增加了肝脏的重量和器官指数。血清ALT和AST是肝损伤的主要预测指标，如图5所示，与正常组相比，模型组的血清ALT和AST水平显著增加，而INAE给药组可明显降低两者水平。

INAE抑制IAV感染小鼠肺中HMGB-1和TLR4的表达

HMGB-1是一种非核组蛋白，感染或受损后可从细胞中释放或分泌出来，是免疫系统的前哨，在细胞存活/死亡途径中起着至关重要的作用，被认为是急性肺损伤、局部和全身性炎症等疾病的重要促进剂。有研究显示，HMGB-1与IAV感染宿主的组织破坏和持续的病理变化有关。如图6所示，正常组小鼠肺组织核中正常表达HMGB-1。模型组中显示，HMGB-1表达增加，并在细胞核和细胞中发现大量HMGB-1，而INAE和利巴韦林可降低HMGB-1的过表达和释放。TLR4是病原体识别受体家族（PRR）的重要炎症信号受体之一，在流感病毒和COVID-19入侵中，在免疫系统激活中起着关键作用，同时也是细胞因子生产发展的重要跨膜蛋白。正常组小鼠表达少量的TLR4，而模型组表达升高，免疫组织化学染色半定量分析结果显示，HMGB-1和TLR4的表达均随着化合物浓度的升高而降低（p0.05）。

INAE提高抗氧化能力并抑制氧化应激

FARP是评估抗氧化能力的指标，MPO是一种酶，主要存在于嗜中性粒细胞的嗜酸性颗粒中，是炎症、组织损伤和嗜中性粒细胞浸润的标志。如图所示，模型组小鼠的匀浆中TARP值与正常组相比显著降低，INAE给药显著增加了FARP值。MDA是脂质过氧化作用的主要产物，INAE还明显降低了MPO和MDA的产生，表明INAE具有显著的抗氧化能力。

INAE抑制IAV感染小鼠的肺部炎症反应

促炎因子的过量产生在流感病毒感染的发病机理中起关键作用，异常不受控制的细胞因子产生相关的肺损伤和临床症状最终可能导致死亡。TNF-α和IL-6是促炎产生的早期免疫细胞因子，趋化因子为中性粒细胞或巨噬细胞的定向迁移提供信号。如图8所示，相比之下，INAE可逆转肺匀浆中IFN-α、IFN-β水平的升高并促进IFN-γ的表达。MCP-1和RANTES是流感早期感染阶段的主要趋化因子，IP-10属于趋化因子CXC亚家族，并充当T细胞核NK细胞的化学吸引子。INAE处理后，还可明显降低IAV感染小鼠肺匀浆中MCP-1、RANTES和IP-10的表达。此外，INAE给药还可以明显降低TNF-α和IL-6的表达。IL-10是重要的抗炎因子，可通过限制组织损伤所涉及的免疫反应来改善免疫病理。此外，给药组小鼠显示肺匀浆中的IL-10明显增加。

讨论

病毒感染宿主细胞的过程具有三个不同阶段：病毒与宿主细胞的附着、病毒在宿主细胞中的复制和病毒粒子的释放。该文首先在体外评估了INAE的抗流感作用，并考察了病毒感染前、病毒与药物孵育、病毒感染后2小时给药的不同影响。结果显示，在病毒感染之前给药，INAE可显著抑制病毒对细胞的黏附，但对病毒的复制和释放没有抑制作用。此外，靛蓝和靛玉红作为青黛的主要成分，是中国药典中衡量青黛质量的两个重要指标。在本文的研究发现，这两个化合物均不能通过口服给药缓解IAV诱导的ALI症状，具体青黛中其他哪些成分促进了INAE的抗炎抗流感活性，还有待进一步研究。

长按



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